G418 sulfate
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G418,也稱為Geneticin或遺傳霉素,屬于氨基糖苷類抗生素。它通過與核糖體不可逆地結合,破壞其校對能力,導致翻譯過程提前終止或發(fā)生錯譯,從而抑制蛋白質(zhì)合成,阻止敏感細胞的生長。
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G418的結構中含有雙堿基環(huán)醇和2-脫氧鏈霉胺,這些結構通過糖苷鍵與氨基糖連接。G418的獨特性來源于其C-6位置的羥基功能,而非氨基功能。這種結構上的差異使得G418能夠與80S核糖體復合物特異性結合,相較于其他氨基糖苷類藥物,G418對真核細胞蛋白質(zhì)合成的抑制作用更為顯著。
G418常被用于篩選表達氨基糖苷類修飾酶的細胞株。這些修飾酶,如氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶(APH),能夠共價修飾G418的氨基或羥基功能,削弱藥物與核糖體的相互作用,從而產(chǎn)生耐藥效果。當真核細胞成功轉(zhuǎn)染新霉素抗性基因后,它們能夠高效表達氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶,獲得在含有G418的選擇性培養(yǎng)基中生長的能力。
G418作為真核翻譯抑制劑的推薦篩選濃度范圍為100-800 μg/mL。然而,有效的殺傷濃度會因細胞類型、培養(yǎng)基、生長條件等多種因素而異。因此,為了確保篩選的成功,建議通過實驗確定每個特定培養(yǎng)系統(tǒng)的工作濃度。
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G418有液體和粉末兩種形式,液體形式的濃度為50 mg/mL,粉末形式的純度大于700 μg/mg。儲存條件也有明確要求:液體需在2℃~8℃下保存,粉末則在15℃~30℃下避光存放??祵幪峁┒喾N規(guī)格的G418產(chǎn)品,以滿足不同規(guī)模研究的需求。
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