小鼠肺組織單細(xì)胞懸液經(jīng)過一系列染色處理后，在BD Celesta流式細(xì)胞儀上呈現(xiàn)出清晰的細(xì)胞亞群分布圖，B細(xì)胞、NK細(xì)胞、DC細(xì)胞和巨噬細(xì)胞被不同熒光標(biāo)記區(qū)分開來。

小鼠作為最常用的實驗動物模型，在免疫學(xué)、腫瘤學(xué)和發(fā)育生物學(xué)研究中占據(jù)核心地位。對小鼠免疫系統(tǒng)進(jìn)行精準(zhǔn)解析，流式細(xì)胞術(shù)是至關(guān)重要的技術(shù)手段，而抗體試劑的質(zhì)量與選擇直接影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。

01 BD流式抗體技術(shù)平臺與優(yōu)勢

BD Biosciences作為全球領(lǐng)先的流式細(xì)胞術(shù)解決方案提供商，開發(fā)了完整的技術(shù)平臺，包括獨(dú)特的熒光染料系統(tǒng)、抗體驗證流程和配套試劑。

BD Horizon Brilliant系列染料是其核心創(chuàng)新之一，如BV421、BV510、BV605、BV650、BV786等，這些染料具有更高的熒光強(qiáng)度和更好的光譜分離性，使多色流式實驗（如同時分析10個指標(biāo)）成為可能。

BD Pharmingen品牌抗體經(jīng)過嚴(yán)格驗證，確保批間一致性和特異性。BD還提供完整的配套試劑，如FcR阻斷劑、固定破膜試劑和染色緩沖液，形成完整的實驗工作流程。

針對小鼠細(xì)胞表面標(biāo)志物篩選，BD推出了Lyoplate?篩選系統(tǒng)，這是一個預(yù)格式化的96孔板抗體集合，便于快速篩查和鑒定小鼠細(xì)胞表面抗原表達(dá)。

02 小鼠主要免疫細(xì)胞亞群的BD抗體選擇

合理搭配不同熒光標(biāo)記的抗體是流式實驗成功的關(guān)鍵。下面按細(xì)胞類型分類，列出常用的BD小鼠流式抗體。

泛白細(xì)胞標(biāo)記抗體是實驗的起點(diǎn)，用于圈定免疫細(xì)胞群體：

T細(xì)胞及其亞群的深入分析需要多個標(biāo)志物組合。T細(xì)胞研究中需要區(qū)分不同功能狀態(tài)的細(xì)胞，如初始T細(xì)胞、效應(yīng)T細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。

B細(xì)胞、NK細(xì)胞和髓系細(xì)胞的鑒定則需要另一套標(biāo)志物組合。這些細(xì)胞在固有免疫和適應(yīng)性免疫中扮演不同角色，需要多參數(shù)同時檢測以準(zhǔn)確區(qū)分。

在實際研究中，科研人員通常需要根據(jù)組織類型和研究問題設(shè)計特定的抗體組合。例如，江蘇省疾病預(yù)防控制中心在2024年的采購需求中，就包含了多種BD流式抗體用于免疫分析研究。

針對小鼠肺組織免疫細(xì)胞的全面分析，可以采用10色方案同時檢測B細(xì)胞、NK細(xì)胞、DC細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。

該方案使用了BD Celesta流式細(xì)胞儀（3激光12色配置），涵蓋了從活死染色（Fixable Viability Stain 510）到各種細(xì)胞表面標(biāo)志物的完整檢測體。

對于小鼠脾臟免疫細(xì)胞的深度分析，9色方案可以同時解析初始T細(xì)胞、效應(yīng)T細(xì)胞、Th17細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。

這種方案需要結(jié)合表面標(biāo)記染色和核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子檢測，因此需要使用BD的Transcription Factor Buffer Set等破膜固定試劑。

04 實驗設(shè)計與優(yōu)化要點(diǎn)

進(jìn)行多色流式實驗時，有幾個關(guān)鍵因素需要考慮。光譜重疊與補(bǔ)償調(diào)節(jié)是多色流式實驗的基礎(chǔ)，必須為每個熒光染料設(shè)置單陽管，使用BD CompBeads或?qū)嶋H細(xì)胞樣本進(jìn)行補(bǔ)償調(diào)節(jié)。

Fc受體阻斷對減少非特異性結(jié)合至關(guān)重要，特別是在檢測髓系細(xì)胞時，可使用小鼠CD16/CD32抗體（貨號553141）進(jìn)行預(yù)處理。

熒光染料搭配原則應(yīng)遵循亮度匹配原則，將最亮的熒光染料（如BV421）用于表達(dá)量最低的標(biāo)志物，將較暗的染料用于高表達(dá)標(biāo)志物。

當(dāng)同時使用兩種或更多BD Horizon Brilliant染料時，必須使用BD Horizon Brilliant Stain Buffer（貨號563794）以最小化染料間的相互作用。

BD還提供CBA（Cytometric Bead Array）技術(shù)平臺，用于同時檢測多種可溶性蛋白如細(xì)胞因子、趨化因子等，適用于小鼠樣本的有27種因子，包括IFN-γ、IL系列、TNF、MCP-1等。

隨著流式技術(shù)的不斷發(fā)展，BD推出的光譜流式細(xì)胞儀進(jìn)一步提升了多色檢測能力。一位研究人員在對小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞進(jìn)行分析時，使用包含CD3、CD19和CD49b抗體的篩選面板排除了T細(xì)胞、B細(xì)胞和NK細(xì)胞的污染，確保了對目標(biāo)細(xì)胞群的準(zhǔn)確分析。

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